古朵生物| ELISA實(shí)驗(yàn)之樣本前期的處理方法
古朵生物| ELISA實(shí)驗(yàn)之樣本前期的處理方法
ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。接下來(lái)古朵生物技術(shù)小編就為大家介紹一下不同樣本在實(shí)驗(yàn)之前的處理方法。
一、均質(zhì)
1、組織樣本：肉、肝食品類切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。
2、水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿。原料表面較臟時(shí)，需適當(dāng)用蒸餾水清洗。
3、蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。
4、水果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。
二、振蕩提取
將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測(cè)組分。振蕩方式主要就是用振蕩器進(jìn)行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。在組織樣本中加入有機(jī)溶劑之間提取時(shí)，應(yīng)邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團(tuán)，不利于提取。
三、濃縮
由于凈化過(guò)程中引入的溶劑，可能會(huì)降低待測(cè)組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈桑儆脧?fù)溶液溶解干燥殘留物。濃縮方式包括用氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜等。
請(qǐng)注意：
1、在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。
2、在吹樣本時(shí)，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。
3、樣本吹干后應(yīng)立即取下，避免吹的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，影響終檢測(cè)結(jié)果。
4、不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
四、乳化現(xiàn)象
在用有機(jī)溶劑提取過(guò)程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，解決的方法有：
1、用細(xì)頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復(fù)離心。
2、再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
五、凈化
經(jīng)過(guò)提取的待測(cè)組分中通常含有一些會(huì)干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測(cè)組分與雜質(zhì)分離的過(guò)程，我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的常見(jiàn)的凈化是液液分配法。比如，用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷，在加入正己烷和復(fù)溶液渦動(dòng)后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可以用60℃水浴加熱，至乳化現(xiàn)象消失或減弱后，加大離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心。
實(shí)驗(yàn)樣本的處理可謂是ELISA實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟之一，所以科研朋友一定要多加注意。
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