雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒操作說明書由上海古朵生物提供詳細(xì)介紹！中文名：雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒，別名：雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA kit，規(guī)格：48t/96t,用途：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。特點：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。

上海古朵生物提供雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒操作說明書，價格，規(guī)格，用途，特點等詳細(xì)介紹，本司長期現(xiàn)貨供應(yīng)進(jìn)口/國產(chǎn)ELISA檢測試劑盒，出售不同系列的金標(biāo)檢測試劑盒，白介素試劑盒，染色試劑盒，生化試劑盒，酶聯(lián)免疫試劑盒，提供代測服務(wù)，種屬有大鼠ELISA試劑盒，小鼠elisa試劑盒，植物ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，狗ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，馬ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，更多動物種屬請來電聯(lián)系我司銷售人員！

中文名：雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒
供應(yīng)商：上海古朵
保存：2-8℃
有效期：6個月
檢測原理：狗膽囊收縮素(CCK)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
用途：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
特點：敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。
檢測目的:用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本，例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：
①標(biāo)本因素；
②試劑因素；
③操作因素。


雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒說明：
1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。
2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。
4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。


實驗原理：
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。


雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒標(biāo)本的采集與保存：
1.  血清：
將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿：
用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿：
1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；
2） 可同時選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨，該過程需在冰上進(jìn)行（有條件實驗室可選用機(jī)器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融 進(jìn)一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次）。
3） 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測。
4. 細(xì)胞裂解液：
1）貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）；
2）將收集到的細(xì)胞用冷PBS 洗3 次；
3）物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：
i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂。
ii 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20 oC 以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3 次，使細(xì)胞溶脹破碎。
4）將標(biāo)本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘，收集上清備用。
5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：
請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。


雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒操作說明書操作步驟：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。


雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒注意事項：
1.使用前 TMB 顯色液應(yīng)為無色透明溶液，若發(fā)現(xiàn)顏色異常，請及時與廠家聯(lián)系。
2.用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
3. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
4.建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5.要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活！
6.為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。
7.禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。
8.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
9.為避免酶標(biāo)板在恒溫箱中由于溫度的不勻所帶來的邊緣效應(yīng)（位于邊緣的孔總是反應(yīng)強(qiáng) 一些），已稀釋好的 ABC 和 TMB 顯色液在加入酶標(biāo)板孔前都應(yīng)預(yù)先在 37℃中平衡至少 30 分鐘。
10.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
11.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
12.底物請避光保存。
13.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
14.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
15.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。


雞骨成型蛋白4(BMP4)ELISA試劑盒操作說明書實驗流程：
1.實驗前標(biāo)準(zhǔn)品、試劑及樣本的準(zhǔn)備；
2.加樣（標(biāo)準(zhǔn)品及樣本）50μL，37℃孵育30分鐘；
3.洗板5次，加酶標(biāo)試劑50ul，37℃孵育半小時；
4.洗板5次；加入顯色液A，B各50ul,37℃孵育顯色15分鐘
5.加終止液50μL，立即450nm讀數(shù)。
6.計算

特異性：
本試劑盒用于檢測雞骨成型蛋白4(BMP4)，經(jīng)檢測與其它相似物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng)。
由于受到技術(shù)及樣本來源的限制，不可能完成對所有相關(guān)或相似物質(zhì)交叉反應(yīng)檢測，因此本試劑盒有可能與未經(jīng)檢測的其它物質(zhì)有交叉反應(yīng)。